魚油產品中EPA、DHA含量測定氣相色譜儀

普瑞GC-9280型氣相色譜分析法通過新的樣品處理方法和相應色譜條件的選擇，實現(xiàn)對魚油等保健品中EPA、DHA的含量測定。普瑞GC-9280型氣相色譜分析法通過直接加入2，6-二叔丁基對甲酚(bht)、內標二十三酸甲酯、鹽類物質來配置標準品和樣品溶液，直接進樣進行測定。通過對此方法做了方法學驗證，專屬性好，無雜質干擾；線性關系：r2＝0.9998；精密度6針EPA含量rsd為0.49％，DHA含量rsd為0.36％；回收率EPA達到99.5％，DHA達到99.7％。各項驗證指標良好，均符合法規(guī)要求。且本方法測定簡便易行，適用于工業(yè)生產中不同批次魚油樣品的測定。

作為優(yōu)選，樣品溶液的配制方法：

魚油原料：稱取20mg樣品于玻璃瓶中，按照衍生化部分描述進行操作；

魚油軟膠囊：取20粒軟膠囊的內容物于一燒杯中，充分混合，確保不分層，然后按照衍生化部分描述進行操作。

與現(xiàn)有技術相比，普瑞GC-9280型氣相色譜分析法具有如下顯著優(yōu)點：

1、普瑞GC-9280型氣相色譜分析法是以GC法測定魚油中EPA和DHA的含量，而且此GC法適用于軟膠囊、魚油原料中EPA和DHA含量的測定。

2、普瑞GC-9280型氣相色譜分析法先用20g/l氫氧化鈉-甲醇溶液與樣品進行皂化反應后，再用三氟化硼-甲醇溶液與樣品溶液進行反應，可更徹底甲酯化樣品。

3、用bht異辛烷溶液溶解樣品，除易于溶解相應樣品外，bht還能起到抗氧化作用，減少樣品處理過程中的損失。

4、內標法的運用，保證檢測結果的準確。

5、色譜柱選擇hpinnowax，30m×0.25mm，0.25μm,能更好的對組分進行分離的同時，節(jié)約儀器運行時間。

6、根據魚油中各組分沸點的不同，對柱溫溫度進行選擇，能更好分離樣品，節(jié)約儀器運行時間。

以下所用試品及試劑：

試劑：丁羥甲苯(bht)：分析純；二十三酸甲酯：標準品；氫氧化鈉：分析純；甲醇：色譜級；14％三氟化硼甲醇溶液：分析純；異辛烷：色譜級；氯化鈉：分析純；無水硫酸鈉：分析純；水：超純水。

標準品：EPA甲酯批號：bcbm9475v，純度：≥98.5％，來源：sigma-aldrich

DHA甲酯批號：bcbn2286v，純度：≥98.5％，來源：sigma-aldrich；

樣品：1.魚油軟膠囊，2.魚油原料，

例1魚油軟膠囊中EPA、DHA含量的測定

魚油軟膠囊EPA和DHA含量的測定：

(1)bht溶液

取50mgbht溶于1000ml異辛烷。

(2)內標溶液

精密稱取150mg二十三酸甲酯于25ml容量瓶，用bht溶解，并稀釋至刻度。

(3)對照品溶液的配制：

分別精密稱取16mgEPA標準品、12mgDHA標準品于10ml容量瓶，用內標溶液溶解，并稀釋至刻度線。

(4)樣品處理：

成品(軟膠囊)：取20粒軟膠囊的內容物于一燒杯中，充分混合，確保不分層。然后按照衍生化部分描述進行操作。

(5)衍生化：

移取2.0ml內標溶液于每一玻璃瓶中，氮氣吹干；加入1.5ml20g/l的氫氧化鈉-甲醇溶液，擰緊聚四氟乙烯瓶帽；水浴加熱并攪拌7min。冷卻至室溫；加2ml三氟化硼甲醇溶液，擰緊瓶帽；水浴加熱，并時時振搖30min；冷卻至40～50℃，加入1ml異辛烷；轉移溶液至20ml試管；加蓋，并快速振搖30s；立刻加入5ml飽和氯化鈉溶液于玻璃瓶中；加蓋，徹底完全振搖15s；轉移上層液于10ml試管；用1ml異辛烷重復萃??；分兩次用1ml水沖洗異辛烷層；用無水硫酸鈉干燥，得到待檢測樣品溶液。

(6)采用氣相色譜儀對樣品進行檢測：

色譜條件：進樣量1μl，

a)色譜柱：hpinnowax，30m×0.25mm，0.25μm；

b)載氣：氮氣；

c)柱溫：170℃，保持5min；1.5℃/min至188℃保持2min；1.0℃/min